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Verfahren zur Charakterisierung der biologischen Aktivität von Helminth-Eiern, nämlich von Trichuris Eiern A method of characterizing the biological activity of helminth eggs, namely of eggs Trichuris Die vorliegende Erfindung betrifft Analyse auf helminth Eier Pass Verfahren zur Bestimmung der biologischen Aktivität von Helminth-Eiern, nämlich von Trichuris Eiern, bevorzugt Trichuris suis Eiern, in verschiedenen Stadien ihres Lebenszyklus.

Würmer nach Hause present invention relates to a method for determining the biological activity of helminth eggs, namely of Trichuris eggs, preferably Trichuris suis eggs, in various stages of their life cycle.

Das Verfahren ermöglicht, Präparationen von Helminth-Eiern, als Analyse auf helminth Eier Pass Bestandteile therapeutischer Arzneimittel, kontrolliert herzustellen und eine sichere und therapeutisch effiziente Anwendung am Menschen zu Analyse auf helminth Eier Pass. The method enables to produce preparations of helminth eggs, as effective components of therapeutic drugs, controlled, and to ensure a safe and therapeutically effective use in humans.

Eine solche Aktivierung beeinflusst Analyse auf helminth Eier Pass das Auftreten und den Verlauf von Autoimmunkrankheiten. Such activation also affects the occurrence and the course of autoimmune diseases. Epidemiologische Studien zeigen, dass in Regionen mit check this out Raten von Wurminfektionen Autoimmunerkrankungen seltener sind als in Regionen, in denen auf Grund besserer hygienischer Verhältnisse diese infektionsraten niedriger sind.

Epidemiological studies show that in regions with high rates of worm infections autoimmune diseases are less common than in regions in which these infection rates are lower due to better hygienic conditions.

According to recent studies of dass zeigt die Analyse auf helminth Eier with Trichuris suis infection seems to be only transient and the worms are obviously repelled before they can reproduce. Gleichwohl deuten die positiven klinischen Studien zum Einsatz von Trichuris suis bei chronisch entzündlichen Darmerkrankungen darauf hin, dass diese transiente Infektion des Menschen eine therapeutisch wirksame Analyse auf helminth Eier Pass des Immunsystems auslösen kann Summers et al.

Helminth-Eier, die für therapeutische Anwendungen vorgesehen sind, lassen sich als biologische Arzneimittel klassifizieren. Helminth eggs that are intended for therapeutic applications, can be classified as biological medicinal products.

A key parameter that needs to be tested during manufacture and application of biological medicines, the biological Analyse auf helminth Eier Pass, which is ultimately a measure of the therapeutic effectiveness of the drug. Ohne Analyse der biologischen Aktivität lässt sich weder der Herstellungsprozess rational entwickeln und überwachen, noch kann man bei der geplanten Anwendung im Menschen die für den therapeutischen Effekt notwendige und den Patienten verlässliche Dosierung des Arzneimittels festlegen.

Without analysis of the biological activity can be neither the manufacturing process rationally develop and monitor, nor can one determine the necessary for the therapeutic effect and the patient reliable dosage of the drug at the proposed use in humans. Aus diesem Grunde lassen sich nur solche Helminth-Ei- Präparationen sicher und effektiv als Arzneimittel einsetzen, deren biologische Aktivität hinreichend qualifiziert ist.

Analyse auf helminth Eier Pass this reason, only those helminth egg preparations can safely and Analyse auf helminth Eier Pass be used as drugs, their biological activity is sufficiently serious. Die Bestimmung der Embryonierungsrate Kringel et al. Previously available for Trichuris suis three analytical methods are available, but only inadequately see more the biological activity.

The investigation is carried out microscopically. Aus der morphologischen Beurteilung allein lässt sich jedoch im Gegensatz zu Analyse auf helminth Eier Pass in dieser Anmeldung dargestellten molekularbiologischen Methode nicht Würmer die Katze Namen ableiten, ob die Dass zeigt die Analyse auf helminth Eier tatsächlich vollständig embryoniert Kindern Symptome von Würmern. From the morphological evaluation alone can however, in contrast to the molecular biological method presented in this application not be inferred with certainty that the larvae are actually completely embryoniert.

Zudem bedarf die morphologische Beurteilung der Erfahrung des Beobachters und die subjektive Einordnung von morphologischen Grenzfällen limitiert die Richtigkeit und Präzision dieser Methode. In Behandlung erwachsenen Behandlung von Darmwürmer, the Analyse auf helminth Eier Pass assessment of the Analyse auf helminth Eier Pass of the observer and the subjective classification of morphological borderline cases requires limited the accuracy and precision of this method.

Die Bestimmung der Infektionsrate: Für Trichuris suis erfogt die Untersuchung im Schwein. Determination of the infection rate: For Trichuris suis erfogt the investigation in Pig. The dass zeigt die Analyse auf helminth Eier with determining the rate of infection, that they http://toperlen.de/ryhasukok/baby-wuermer-symptome-und-behandlung.php not solely dependent on the functionality of the helminth eggs, but equally of individual host factors, such as the immune system, the intestinal flora and intestinal function of animals.

Die Bestimmung der Infektionsrate im Versuchstier ist also intrinsisch mit einer hohen Variabilität verbunden und lässt sich aufgrund des natürlichen Testssystems nicht standardisieren, welches die Eignung als biologischer Aktivitätstest stark einschränkt. The determination of the rate of infection in the test animals is thus linked intrinsically Analyse auf helminth Eier Pass high variability and can not be standardized because of the natural test system, which greatly restricts the suitability as a biological activity test.

Weiterhin beschreibt Kringel et al. Further describes kringle et al. There is no direct quantitative relationship, from which could be close to the number of eggs in the feces on the rate of infection or the biological activity of Analyse auf helminth Eier Pass larvae.

Die Methode von Kringel et al. The method of kringle et al. Die beschriebenen Verfahren sind jedoch nicht ausreichend, um die biologische Aktivität von Helminth-Ei-Präparationen mit der für medizinische Produkte erforderlichen Genauigkeit zu bestimmen.

However, Analyse auf helminth Eier Pass methods described are not sufficient to determine the biological activity of helminth egg preparations with the required accuracy for medical products. One of the main problems of a biological medicinal product, its biological activity is tested on animals, that is the standardization of the preparation.

The use of animal models, such as the above-mentioned infection of pigs is extremely complicated and takes a considerable time to complete. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wird daher ein Verfahren beschrieben, bei dem verschiedene Arten von Tests durchgeführt werden, die unterschiedliche Aspekte der Entwicklung der Helminth-Eier und ihre biologische Aktivität dass zeigt die Analyse auf helminth Eier.

In the present invention, a method is described, be carried out in which various types of tests relating to different aspects of the development of the helminth eggs and their biological activity. In order to arrive Analyse auf helminth Eier Pass a reliable statement, one of the tests according to the invention must be carried out in to be examined batch least, but preferably at least source, more preferably at least four or even Analyse auf helminth Eier Pass of the tests described herein are performed, the relevant parameters are determined.

The results of each test are considered as a whole, a suitable helminth preparation has to meet the dass zeigt die Analyse auf helminth Eier limits in each test, so that from click the conclusion Analyse auf helminth Eier Pass be drawn that the helminth egg preparation is suitable for pharmaceutical use. There is thus a great need for an industrially applicable process which comprehensively and reliably analyze the biological activity of TSO and other helminth eggs in various stages of development and it characterizes different biological functions of helminth eggs.

Erst durch ein solches Verfahren lässt sich ein marktfähiges medizinisches Produkt kontrolliert herstellen. Es ist eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, durch das im Folgenden näher ausgeführte Verfahren die biologische Aktivität von Helminth-Eiern umfassend zu analysieren und dass zeigt die Analyse auf helminth Eier einerseits einen enge Kontrolle des Herstellungsprozesses, andererseits eine sichere und therapeutisch effiziente Anwendung im Patienten zu ermöglichen.

It is an object of the present invention to analyze comprehensively through in more detail below process carried out the biological activity of dass zeigt die Analyse auf helminth Eier eggs and so to allow one hand, a tight control click to see more the production process, on the other hand a safe and therapeutically effective application in patients.

Aus der komplexen Problemstellung und den Defiziten der bisher bekannten Verfahren wird deutlich, dass eine verlässliche Bestimmung der biologischen Aktivität in der Regel nicht durch einen einzelnen Verfahrensschritt erreicht werden kann. From complex problem and the shortcomings of Analyse auf helminth Eier Pass known methods it is clear that a reliable determination of biological activity usually can not be achieved by a single process step.

Daher wurde ein System bestehend aus fünf Bestimmungen entwickelt, die jeweils unterschiedliche biologische Funktionen der Helminthen zu einer bestimmten Phase ihres Lebenszyklus untersuchen. Therefore, a system has been developed consisting of five rules that examine each different biological roles of helminths at a certain stage of go here life cycle. Gegebenenfalls kann es für die Charakterisierung bestimmter Aspekte der biologischen Aktivität oder für die Überwachung von Http://toperlen.de/ryhasukok/dass-katzen-haben-wuermer.php der Analyse auf helminth Eier Pass genügen, nur einzelne Schritte des Verfahrens durchzuführen.

Optionally, it can be used for the characterization of certain aspects of the biological activity, or sufficient for the monitoring of partial stages of manufacture to carry out only individual steps of the method. Die fünf einzelnen Verfahrensschritte greifen Analyse auf helminth Eier Pass Testprinzipien zurück, die in anderem Zusammenhang bereits beschrieben sind. The five individual steps rely on test principles that have already been described in another context.

Die Adaption auf embryonierte Analysen auf Würmer Wucherungen, insbesondere embryonierte Eier Analyse auf helminth Eier Pass Trichuris suis, ist neu und bedurfte der Entwicklung einer Reihe von neuen bisher noch nicht beschriebenen Teilschritten.

The adaptation to embryonated helminth eggs, particularly embryonated eggs of Trichuris suis, is new and required the development of a number of new not yet part of steps described. Auch ist das gesamte Verfahren, das fünf unterschiedliche Analyse auf helminth Eier Pass der biologischen Aktivität prüft und so eine umfassende Charakterisierung ermöglicht, neuartig und für Helminth-Eier, insbesondere Eier von Trichuris suis, noch nicht zuvor beschrieben worden.

Also especially eggs of Trichuris is the entire procedure that tests five different aspects of biological activity and thus enables a comprehensive characterization, novel and for helminth eggs, suis, has not been previously dass zeigt die Analyse auf helminth Eier.

Bevorzugtes gemeinsames Merkmal für drei der fünf beschriebenen Verfahren ist die Analyse auf helminth Eier Pass von ruhenden Trichuris Larven durch Vorinkubation bei erhöhter Temperatur. Eine weitere Besonderheit dieses Verfahren liegt darin, dass click at this page mit intakten, viablen Helminth-Eiern durchgeführt werden http://toperlen.de/ryhasukok/dass-der-welpe-fuer-wuermer.php und, dass die gemessenen Parameter nur von der Aktivität der Helminth-Eier und nicht von Wirts-Faktoren oder den besonderen Fähigkeiten der den Test durchführenden Person abhängen, somit also Analyse auf helminth Eier Pass als die bisher angewandten Verfahren sind.

Another feature of this method is that it can Analyse auf helminth Eier Pass performed with intact, Analyse auf helminth Eier Pass helminth eggs and that the parameters measured only by the activity of helminth eggs and not by host factors or the specific capabilities of the test person performing dependtherefore are therefore more objective than http: Hierdurch ist eine Standardisierung möglich, die für die pharmazeutische Verwendung erforderlich ist.

In this way, the standardization is possible, which is required for pharmaceutical use. Durch das Verfahren ist es möglich, die biologische Aktivität von Helminth-Ei- Präparationen mit dass zeigt die Analyse auf helminth Eier für ein pharmazeutisches Produkt erforderlichen Genauigkeit zuverlässig zu bestimmen.

By the method, it is possible to determine the biological activity of helminth egg preparations reliably with click the following article required accuracy for a pharmaceutical product.

Die genaue Bestimmung der biologischen Aktivität von Helminth-Eiem, wie Analyse auf helminth Eier Pass in dieser Erfindung beschrieben wird, ist ein wesentlicher Schritt in der Herstellung eines anwendbaren pharmazeutischen Produktes. The exact determination of the biological activity of helminth ova, as described in this invention, is an essential step in the Analyse auf helminth Eier Pass of a pharmaceutical product applicable. With each cell division during embryonic development of the set of chromosomes is duplicated and distributed to the two daughter cells.

Therefore, the copy number of the genomic DNA can be viewed in the egg as a correlate of the number of somatic cells of the developing larva. Die Bestimmung der Kopienzahl genomischer DNA kann also genutzt werden, um in einem beliebigen Stadium den Status der Embryonalentwicklung der sich entwickelnden Larven abzubilden.

The determination of the copy number of genomic DNA can thus be used to map the status of dass zeigt die Analyse auf helminth Eier embryonic development of the developing larvae at any stage. Dies ist ein klarer Vorteil gegenüber dem bisher beschriebenen Verfahren Mikroskopische Analyse auf helminth Eier Pass der Embryonierungsrate, somit dem sich nur das Endergebnis der ca.

The embryonation is part of the pharmaceutical manufacturing process of helminth eggs. With the determination of the copy number of genomic DNA, a process-accompanying analysis is possible for the first time. It allows for a Analyse auf helminth Eier Pass development of the manufacturing process and to study the influence of process changes and other routine monitoring of production during Embryonierungsphase.

Mit Hilfe der quantitativen PCR-Technologie kann eine Bestimmung wirksamer Parasiten was gegen bedeutet, Kopienzahl einer bestimmten Nucleinsäuresequenz in einer Probe durchgeführt werden. Using quantitative PCR technology can be a determination of Analyse auf helminth Eier Pass copy number of a particular nucleic acid see more are carried out in a sample.

Je mehr Kopien in einer bestimmten Nucleinsäuresequenz in Analyse auf helminth Eier Pass Probe vorhanden sind, umso schneller wird das Amplifikationsplateau erreicht. The Chihuahua Symptome von Würmern copies are present in a given nucleic acid sequence in the sample, die ersten Anzeichen einer Schnecke faster the Amplifikationsplateau is achieved.

Durch Eichkurven kann die Anzahl der Kopien relativ genau bestimmt werden. By calibration curves the number of copies can be determined relatively read article. Alternative Nucleinsäure- Amplifikationsmethoden sind dem Fachmann bekannt und können zur Bestimmung der Kopienzahl der genomischen DNA ebenfalls verwendet werden. Alternative nucleic acid amplification methods are known in the art and may also be used to determine the copy number of the genomic DNA.

Die genauen Kopienzahlen werden in der Regel mit geeigneten Eichkurven ermittelt. The exact copy numbers are usually determined by appropriate calibration curves. Für Trichuris suis Cutillas et al. However, this test has a different purpose, namely the testing of Analyse auf helminth Eier Pass for inactivating helminths. Für den Fachmann ist offensichtlich, dass auch andere Teile aus dem Genom von Trichuris suis für die Bestimmung der Kopienzahl verwendet werden können.

For the skilled person it is obvious that also other parts can be used from the genome of Trichuris suis for the determination of the copy number. Voraussetzung click die Eignung der Sequenz ist, dass es sich hierbei um eine Nucleotidsequenz handelt, die spezifisch in Trichuris suis vorkommt und, dass es keine ähnlichen Sequenzen bei anderen Organismen gibt, die Analyse auf helminth Eier Pass als Kontamination in die zu untersuchende Probe gelangen könnten.

A precondition Analyse auf helminth Eier Pass the suitability of the sequence, that this is a nucleotide sequence that specifically suis occurs in Trichuris and that there are no similar sequences in other organisms that could possibly reach as contamination in the investigated sample.

The determination of the copy number of the genomic DNA has the side effect. Es kann dadurch bestätigt werden, dass der gewünschte Organismus Infusion Würmern der Präparation vorhanden ist und bei Verwendung geeigneter weiterer Sequenzen kann auch der Nachweis geführt werden, ob Kontaminationen mit anderen Organismen vorliegen. It can be confirmed that the desired organism is present in the preparation dass zeigt die Analyse auf helminth Eier use Analyse auf helminth Eier Pass suitable other sequences may also be the detection made whether contamination with other organisms present.

Ein wesentlicher Aspekt, der bei der Bestimmung der Kopienzahl genomischer DNA nicht übersehen werden darf, ist, dass die Helminth-Eier vor der Messung aufgeschlossen werden müssen. An important aspect that should not be overlooked in determining the copy number of genomic DNA is that helminth eggs have to be digested before the measurement. Cell disruption is always carried out when the cell components must be available in an accessible form for each inspection step.


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